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本产品是一种基于化学方法的高产膜蛋白提取试剂盒。适用于从各种除大型真菌（蕈菌）类以外的其他真菌类样本中提取总蛋白。包括各种丝状真菌（霉菌）、酵母样本。试剂盒组分针对真菌厚细胞壁样本进行优化，提取过程简单方便，可用于纯化膜蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。

该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白用于双向电泳。如需要用于报告基因检测、SDS-PAGE电泳检测、Western blotting、凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验的试剂盒，请联系我公司，选用其它产品号的产品。

如需要用于大型真菌（蕈菌）、酵母的蛋白提取，请选用我公司其他货号的试剂盒。

• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 试剂C低温储存可能会有沉淀析出，水浴加热溶解后混匀即可。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 试剂准备：
  每500μL膜提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 取50～100mg样本，置于研钵中用液氮研磨。
  注：
  ● 样本数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
  ● 没有液氮研磨条件也可以直接加入冷的提取液A在冰上研磨处理。
  ● 如果组织样品很细小，可以剪碎后直接加入提取液2～8℃振荡。
  
• 加入500μL提取液A，移入一个干净离心管中在2～8℃振荡1～2小时。
  注：如果无2～8℃持续振荡条件，也可直接置2～8℃冰箱静置1～2小时，中间每隔10分钟涡旋振荡混匀即可。
  
• 将提取液在2～8℃条件下12000×g离心5分钟，取上清。
  
• 在上清中加入5μL提取液B，充分混匀。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃ 1000×g离心3分钟。
  注：
  ● 此步骤必须37℃条件下离心。
  ● 如果离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。
  
• 此时液体分为2层，小心移除上层部分，吸取下层管底部大约30～50μL液体。
  注：下层为粘稠状液体。
  
• 用50～150μL冷的膜蛋白溶解液C溶解下层溶液，即得膜蛋白样品。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

• 蛋白浓度低？
  膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。处理部分细胞样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。